Caracterización bioquímica y genética de la producción de poligalacturonasas de " Saccharomyces cerevisiae "

Resumo

Saccharomyces cerevisiae produce endopoligalacturonasas exocelulares de forma constitutiva. La produccion de estos enzimas se reprime cuando se incuban los cultivos en agitación (alta disponibilidad de oxigeno) y está sometida a represión catabólica por la fuerte de carbono. El estudio de esta capacidad mediante técnicas de genética clásica demostró que la cepa diploide silvestre 1389 contiene dos genes estructurales que codifican para la producción de pectinasas y la cepa genética IM1-8b sólo uno. El análisis de mutantes obtenidos mediante tratamiento de S. cerevisiae IM1-8b con etilmetano sulfonato puso de manifiesto que en esta cepa existen al menos tres grupos de complementación implicados en la producción del fenotipo halo de hidrólisis en placas con ácido poligalacturónico. El gen responsable de la producción de poligalacturonasas en la cepa IM1-8b fue clonado utilizando la técnica de PCR Y SE denominó PGU1. La expresión de este gen bajo el control de distintos promotores mostró que la actividad depende del plásmido utilizado y del fondo genético de la cepa de S. cerevisiae transformada. Este gen se encuentra en todas las cepas analizadas independientemente de que sean positivas o negativas en placa. La secuencia de aminoácidos predicha en base a la secuencia de nucleótidos obtenida mostró que las poligalacturonasas (PG) de levaduras presentan una homología de un 54% con las PGs de hongos y solo de un 25% con las PG de bacterias y plantas. S. cerevisiae es capaz de expresar una proteina inhibidora de poligalacturonasas (PGIP) de frambuesa, pero este inhibidor no es activo contra la PG de la levadura. Algunas cepas seleccionadas de S. cerevisiae no reducen la viscosidad del mosto durante la fermentación para la elaboración del vino, pero disminuyen de forma notable el tiempo de filtración facilitando la clarificación del mismo.