Proliferación y apoptosis en hepatocitos en cultivo, protimosina alfa y gliceraldehído 3 fosfato deshidrogenasa

  1. BARBINI VEGA LUCIANA FERNANDA
Supervised by:
  1. Felix Vega Lisi Director
  2. Fernando Domínguez Puente Co-director

Defence university: Universidade de Santiago de Compostela

Fecha de defensa: 17 February 2003

Committee:
  1. Luis Felipe de la Cruz Palomino Chair
  2. Mercedes Rodríguez Vieytes Secretary
  3. José Antonio Villamarín Cid Committee member
  4. Joaquín Rodríguez Committee member
  5. Federico Mallo Ferrer Committee member

Type: Thesis

Teseo: 93674 DIALNET

Abstract

El estudio de los procesos de proliferación y apoptosis en el hígado es de gran importancia debido a que su desregulación genera un amplio número de enfermedades hepáticas. En este trabajo de tesis es estudió la participación de dos proteínas (protimosina alfa, PTA y gliceraldehído 3 fosfato deshidrogenasa, GAPDH) en los procesos de proliferación y apoptosis hepática. El mayor conocimiento acerca de la participación de estas proteínas en estos proceso, permitirán desde la investigación básica aportar en el entendimiento de las patologías del hígado y contribuir a la prevención, el diagnóstico o tratamiento de las mismas. Para esto, y en primer lugar, se establecieron los sistemas de hepatocios primarios y de línea celular en cultivo, se indujeron a proliferar con HGF, se determinaron las condiciones óptimas de esta inducción, y se pusieron a punto métodos de determinación de la proliferación celular. Por otro lado, se indujo la apoptosis de los hepatocios con dos agentes (TGF-beta1 y cicloheximida), se determinaron las condiciones óptimas de esta inducción, y se pusieron a punto las metodologías de determinación de apoptosis. Se estudiaron los niveles de RNA menajero de la PTA (por Northern Blot) en la quiescencia, la apoptosis y la proliferación celular, determinándose que existe un aumento de la expresión de esta proteína en la proliferación y una disminución en la apoptosis. Para la GAPDH se estudió su expresión a nivel de proteína en extractos proteicos nucleares y citoplasmáticos, mediante la técnica de Western Blot. La expresión del GAPDH resultó aumentada en los núcleos apoptóticos y en los citoplasmas proliferantes y apoptóticos. Para estudiar la localización de estas proteínas en los distintos estados celulares (quiescencia, proliferación y apoptosis) se realizó una inmunocitoquímica que se observó al microscopio confocal. Mediante esta técnica se localizó a la PTA en l