Evaluacion funcional de la preservación hipotérmica de hepatocitos mediante el cultivo primario

Abstract

La justificación de este trabajo es lograr un sistema eficaz para la obtención de hepatocitos viables y funcionalmente activos mediante la técnica de preservación en frío y su posterior cultivo. Este método de preparación presenta gran interés como sistema de provisión de células para posteriores estudios fisiológicos, fisiodinámicos o posibles trasplantes. Con el objetivo de evaluar la viabilidad y funcionalidad de los hepatocitos sometidos a distintos tratamientos obtenemos células idóneas para su posterior cultivo; utilizamos parámetros de tipo fisiológico y bioquímico. Con todo esto podemos determinar los tiempos a que pueden cultivarse hepatocitos aislados, previamente mantenidos a diferentes tiempos de preservación en frío. En función de los resultados por nosotros obtenidos concluimos que: 1.- Los estudios de fijación a placa indican que los procesos involucrados en la adhesión celular e interacciones celulares se mantienen y desarrollan durante todo el proceso. 2.- Los niveles de GSH mantenidos y aún aumentados, en las células preservadas en frío confirman los beneficios de su inclusión en la solución UW. 3.- La síntesis de urea, en condiciones basales y después de una carga de amonio, es mantenida o estimulada; lo que demuestra un adecuado funcionamiento del metabolismo celular. 4.- Las células cultivadas o preservadas hasta 72 horas pueden ser eficientes en la detoxificación de amonio, posibilitando su utilización en dispositivos extracorporales (órgano bioartificial) o trasplante. 5.- El examen microscópico de los cultivos evidencia una correlación aceptable con los estudios funcionales. 6.- La albúmina se mantiene bien comparada con parámetros metabólicos; en éstos se aprecia una disminución progresivamente más acelerada. En base a las conclusiones precedentes, se recomienda un tiempo máximo de 72 horas de preservación en solución UW. Consideramos