Estudio de la respuesta inmune y expresión génica del mejillón mediterráneoMytilus galloprovincialis

Resumo

El cultivo de moluscos bivalvos supone una de las mayores producciones de la acuicultura en Europa. Los bivalvos carecen de un sistema inmune adaptativo específico lo que imposibilita el uso de vacunas. Esto hace que el estudio de los mecanismos inmunológicos de estos organismos sea muy limitado y el control de las enfermedades se haya basado hasta la fecha, en el diagnóstico de los agentes patógenos y en el buen manejo de los stocks. Por todo ello, el objetivo de la tesis doctoral se centró en la identificación, caracterización y estudio de genes implicados en respuesta inmune del mejillón mediterráneo, que puedan ayudar a conocer mejor cuales son los mecanismos de defensa de esta especie de enorme interés acuícola. Se han llevado a cabo dos aproximaciones para la detección de genes implicados en respuesta inmune: la clonación por homologia y dos librerías sustractivas. Los resultados revelaron que la segunda de las técnicas es más fiable para la detección de genes implicados en defensa, siendo los péptidos antimicrobianos (AMP) los transcritos más abundantes en ambas librerías. Además las ESTs con homología a AMPs presentaron una altísima variabilidad incluso a nivel proteico, detectándose un total de 18 formas proteicas en 100 individuos. Analizando en detalle todas las formas detectadas se detectó una nueva clase de péptido antimicrobiano que, por continuación con la nomenclatura existente y por homología con las miticinas, llamamos Miticina C. Este AMP no sólo presentó variabilidad en la población sino que este alto nivel de polimorfismo se detectó en cada uno de los individuos analizados. Tras el análisis mediante DGGE de más de 100 mejillones individuales comprobamos que cada uno de ellos tiene sus propias bandas de Miticina C que so nexclusivas de cada individuo. Además, estas formas no parecen modularse tras una estimación. Los individuos pertenecientes a la misma zona geográfica o al mismo grupo de mejillones no presentan ningún tipo de patrón común con respecto a otros. Tan sólo los invididuos pertenecientes a la misma familia, los procedentes de los mismos padres, mostraron un patrón de bandas común. El hecho de que la Miticina C posea la característica clave de los genes inmunes, junto con su expresión ubicua y temprana en el desarrollo, sugiere el importante papel que este AMP debe jugar en el sistema inmune del mejillón. También se han realizado estudios funcionales y moleculares tras la estimulación in vitro como in vivo con moléculas vivas e inertes. Los resultados obtenidos sugieren que los hemocitos de mejillón presentan una respuesta diferente en función del estímulo administrado, sugiriendo que son capaces de discriminar entre diferentes moléculas y que probablemente desencadenen una cascada molecular diferente. Los resultados obtenidos en esta tesis han aportado nuevos conocimientos sobre los mecanismos moleculares del mejillón mediterráneo, que ayudarán a mejorar el bienestar de esta especie de enorme interés acuícola.