Cambios moleculares y cinéticos en la enzima alfa-l-fucosidasa durante la diferenciacion enterocítica de la línea celular ht-29 de adenocarcinoma de colon humano

Resumo

En estudios previos se ha observado una relación inversa entre l nivel de actividad alfa-L-fucosidásica y el grado de diferenciación de tumores de colon. Considerando la diferenciación celular como un proceso inverso al desarrollo tumoral, el objetivo principal de este trabajo fue evaluar si el comportamiento de esta enzima durante la diferenciación de líneas celulares de colon humano reflejaba cambios inversos a los que ocurren en el proceso tumoral. Los resultados muestran que a lo largo del proceso de diferenciación la enzima alfa-L-fucosidasa experimenta un incremento gradual en su actividad, por lo que las células diferenciadas contienen niveles superiores de actividad alfa-L-fucosidásica intracelular.La cuantificación de la proteína específica en bambos fenotipos celulares indica un aumento en la misma, aunque inferior al incremento observado en la actividad específica. Hemos comprobado que el incremento detectado no es debido a cambios en el valor de pH óptimo, en la estabilidad frente al pH y a la temperatura, o en su afinidad frente al sustrato sintético 4-MU-fucósido. La disminución en la actividad intracelular no se debe tampoco a una alteración de la secreción de la enzima al medio extracelular ni a la presencia de inhibidores o activadores de dicha actividad. Sin embargo, el patrón de glicosilación y el estado de agregación de la enxima sí es dependiente del fenotipo celular. Tras la diferenciación celular la enzima muestra un mayor número de manosas, así como un mayor estado de agregación, que la presente en cultivos no diferenciados. Hemos obserbado también diferencias en la afinidad de la enzima durante la cromatográfia empleada para su purificación, obteniendo un mayor rendimiento y grado de purificación al purificar la enzima presente en los cultivos diferenciados. Además, hemos comproabado que, a pesar de que se considera tradicionalmente como una enzima lisosómic, en células HT-29 l