Generación y caracterización de anticuerpos multivalentes y multiespecíficos basados en dominios de trimerización derivados del colágeno humano

Résumé

En este trabajo describimos una nueva clase de mole¿culas multivalentes y multiespeci¿ficas basadas en anticuerpos con potencial terape¿utico. Estas mole¿culas, denominadas trimerbodies, se generan a partir de armazones proteicos derivados de la regio¿n de trimerizacio¿n del dominio NC1 de los cola¿genos humanos tipo XVIII y XV (hRT), flanqueada por uno o dos linkers flexibles. Mediante la fusio¿n de fragmentos de anticuerpo en formato monocadena (scFv) o en formato monodominio (VHH), con igual o diferente especificidad a los extremos amino y/o carboxilo de la hRT, hemos generado anticuerpos recombinantes mono o biespeci¿ficos, trivalentes o hexavalentes, que fueron secretados de forma eficiente como protei¿nas solubles por ce¿lulas de mami¿fero transfectadas. Los trimerbodies son trime¿ricos en solucio¿n, exhiben excelentes propiedades de unio¿n al anti¿geno y son fa¿cilmente purificados a partir del medio condicionado usando me¿todos convencionales. Estos resultados sugieren que la plataforma trimerbody constituye una estrategia prometedora para el desarrollo de una nueva generacio¿n de anticuerpos terape¿uticos: mole¿culas multivalentes y multiespeci¿ficas con un formato optimizado para la farmacocine¿tica deseada y adaptado al contexto patolo¿gico. In this work we describe a new class of multivalent and multispecific antibody- based molecules with therapeutic potential. These molecules, termed trimerbodies, use as a scaffold the trimerization region of human collagens type XVIII and XV NC1 domain (hTR) flanked by one or two flexible linkers. By fusing single-chain variable fragments (scFv) or monodomain antibody fragments (VHH) with the same or different specificity to the N- and/or C-terminus of the trimerizing scaffold domain, we produced monospecific or bispecific, trivalent or hexavalent recombinant antibodies that were efficiently secreted as soluble proteins by transfected mammalian cells. Trimerbodies are trimeric in solution, exhibit excellent antigen binding capacities and are easily purified from conditioned media with conventional methods. These results suggest that the trimerbody platform constitutes a promising strategy for the development of the next-generation therapeutic antibodies, i.e., multivalent and multispecific molecules with a format optimized for the desired pharmacokinetics and adapted to the pathological context.!