Búsqueda de enzimas lipolíticas termófilas y expresión en microorganismos mesófilos

Abstract

El descubrimiento de enzimas lipolfticas con nuevas y/o mejores características es dave para la optimización de biotransformaciones de interés industrial o biotecnológico. Las enzimas termófilas presentan una serie de ventajas como mayor estabilidad frente a altas temperaturas, pH extremos y agentes desnaturalizantes. En este trabajo se estudiaron las enzimas lipolfticas de Thermus thermophilus HB27. Se seleccionaron dos enzimas lipollticas de la secuencia de su genoma y se expresaron en Saccharomyces cerevisiae. Únicamente la esterasa, previamente identificada, se expresó de forma funcional, termo estable y activa a temperaturas mesó filas, ofreciendo mayor rendimiento de producción que la cepa original. También se construyó una geno teca de expresión con el fósmido pCC1FOS, cuyos dones positivos únicamente expresaban dicha esterasa. Alternativamente se buscaron enzimas lipollticas en el manantial termal de Rio Caldo (Ourense 1 mediante metagenómica funcional empleando el fósmido pCC1FOS. En la metagenoteca de un cultivo de enriquecimiento (aceite de oliva como única fuente de carbono l, inoculado con sedimentos, se encontraron más de 100 dones positivos, la mayoría con enzimas lipoHticas del género Geobaci/lus, estudiadas con anterioridad. En la metagenoteca del agua uno de los 6 dones positivos detectados expresaba una nueva esterasa de la familia VIII, con características mesófilas a pesar de su origen termal.