Obtención de anticuerpos monoclonales específicos frente a larvas de mejillón y su aplicación en técnicas de inmunodetección en muestras de planctón

Resumo

Los moluscos bivalvos son muy semejantes morfológicamente en sus primeros estadios de desarrollo. El método actual de identificación larvaria se basa en el análisis de ciertos rasgos morfológicos ultraestructurales de la charnela, siendo un proceso lento y poco práctico para la discriminación larvaria en muestras complejas de plancton. Con el fin de desarrollar técnicas más rápidas, sensibles y específicas, para la discriminación de larvas de Mytilus gallo provincialis, decidimos generar anticuerpos monoclonales (AcsMo) específicos siguiendo el protocolo descrito por los Dres. Milsteiny Köhler. La obtención de larvas se realizó mediante fertilización in vitro. Larvas de dos días de edad se utilizaron para la inmunización de ratones, y sus esplenocitos fueron fusionados con células de mieloma. Se obtuvieron varios hibridomas secretores de AcsMo frente a larvas de mejillón, de los cuales se han estudiado más exhaustivamente dos de ellos: el 36.5 y el 22.8. Estos dos AcsMo son específicos frente a mejillón. No reconocen a larvas de otras especies de bivalvos (berberecho, ostra, volandeira, lameja), pero sí reconocen a larvas de mejillón de otras poblaciones; M.galloprovincialis del Mediterráneo (Genéticamente divergente del gallego), y M.edulis. Ambos AcsMo reconocen, mediante inmunofluorescencia indirecta, a las larvas de mejillon en distintos estadios de desarrollo, incluso a postlarvas. Con el fin de confirmar la utilidad de los anticuerpos en muestras de plancton, los AcsMo se probaron en distintas localizaciones (Galicia, Italia y Holanda), comparando los resultados obtenidos con los AcsMo, con los estudios morfológicos tradicionales. Los resultados mostraron que los AcsMo tiñen, exclusivamente, a larvas de mejillón, no detectándose ningún caso de falso positivo en los muestreos realizados. En este trabajo demostramos que estos anticuerpos aplicados en técnicas inmunológicas proporcionan una herramienta de identific