Caracterización estructural de la ADN topoisomerasa de "Leishmania donovani"

Resum

La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria de índole antropono-zoonótica cuya relevancia ha aumentado en los últimos años, ya que además de ser la tercera causa de muerte en países en vías del desarrollo, su distribución geográfica ha cambiado siendo cada vez más los casos presentes en las zonas periurbanas y no solamente relacionado con coinfecciones de VIH. Uno de los grandes retos dentro de este campo es el hallazgo de dianas terapéuticas válidas, entre las que destaca la ADN topoisomerasa IB de Leishmania spp, compuesta por las subunidades LdTopIL y LdTopIS, frente a la enzima monomérica del hospedador. Esta proteína despliega un papel fundamental en el ciclo vital de la célula, lo que la convierte en la diana idónea para el desarrollo de fármacos específicos con mínimos efectos secundarios en los pacientes. En esta Memoria se ha desarrollado un trabajo de caracterización estructural y funcional, en el que destaca el hallazgo en la subunidad LdTopIS de una región proteica compuesta por 7 aminoácidos, única entre sus ortólogos, que se halla directamente relacionada con su actividad y su sensibilidad frente a venenos específicos de la enzima. Asimismo, se ha demostrado la dispensabilidad de 175 aminoácidos de la región N-terminal de esta misma suunidad para conformar una topoisomerasa con sus características intactas, es decir, activa y sensible a camptotecina (CPT), su inhibidor específico. En lo que se refiere a la subunidad LdTopIL, se puede reducir su extensión hasta 75 residuos en la región C-terminal así como 25 aminoácidos del extremo N-terminal produciendo una merma del 50% aproximadamente de su capacidad relajadora pero manteniendo inalterada la sensibilidad a CPT: de la combinación de los monómeros de menor extensión activos reaparece una protéina activa con una cierta sensibilidad a CPT. En lo que se refiere a la traslocación de la proteína desde su lugar de síntesis, el citosol, hasta su lugar de reacción, el núcleo, se ha demostrado que el transporte núcleo-citoplasmático es independiente para cada una de las suunidades, así como se facilita la descripción de un nuevo motivo, no descrito hasta el momento, capaz de interactuar con el mecanismo de transporte hacia el núcleo.