Extension superficial de complejos y localizacion de secuencias ribosomales en bivalvos veneroideos (bivalviaveneroida)

Resumo

A pesar de que la clase Bivalvia incluye algunas de las especies de invertebrados marinos mejor conocidas, los estudios cromosómicos en estos organismos son muy escasos. Con el fin de contribuir al incremento de los conocimientos citogenéticos en bivalvos, en este trabajo e ha puesto a punto una técnica de extensión superficial de complejos sinaptinémicos (SC) en siete especies de las familias Veneridae (Venus verrucosa, Dosinia exoleta, Ruditapes decussatus, Ruditapes philippinarum y Venerupis pollastra), Mactridae (Spisula solida) y Cardiidae (Cerastoderma edule). La aplicación de esta técnica ha permitido obtener un gran número de progases I con 19 bivalentes en las siete especies del orden Venero ida analizadas y comprobar la existencia de un cierto grado de asincronía en el apareamiento cromosómico en todas ellas. La amplificación mediante PCR de la región correspondiente a los espaciadores transcritos internos (ITS) del rDNA 18+28S y de la unidad de repetición completa del rDNA 5S permitió general secuencias especie específicas que fueron usadas como sondas en experimentos de hibridación in situ fluorescente (FISH) sobre cromosomas mitóticos y SC de las siete especies estudiadas. Las agrupaciones rDNA 18+28S aparecen en un único par cromosómico en las cinco especies de la familia Veneridae, en posición terminal en tres de ella e intercalar en las otras dos. Las secuencias rDNA 5S también aparecen en un único par cromosómico en posiciones terminal o intercalar. En tres de las especies analizadas, Venus verrucosa, Ruditapes philippinarum y Venerupis pollastra, ambos tipos de secuencias están situadas en cromosomas diferentes mientras que en las otras dos, Dosinia exoleta y Ruditapes decussatus, las señales correspondientes al rDNA 5S solapan co las de las agrupaciones rDNA 18+28S. El solapamiento de las señales fue confirmado mediante FISH sobre fibra de cromatina estirada. Por el contrario, Spisula sólida presenta dos agrupaciones rDNA 18+28S y una 5S mientras que en Cerastoderma edule la única agrupación rDNA 18+28S está acompañada por cinco agrupaciones rDNA 5S. En ambas especies estas secuencia ocupan posiciones terminales en los cromosomas. En todas las especies analizadas la calidad de las señales FISH en las hibridaciones sobre SC fue superior a la obtenida al utilizar como sustrato de hibridación cromosomas mitóticos. Los fragmentos ITS y rDNA 5S amplificados muestran longitudes diferentes en las siete especies estudiadas. Estas diferencias de tamaño son en algunos casos claramente visibles en el gel de electroforesis y pueden por lo tanto, ser utilizadas para diferencia muestras procedentes de las siete especies. Debido a ello, el método desarrollado puede ser utilizado en tareas de control del cumplimiento de las regulaciones de etiquetado en productos procedentes del marisqueo. El análisis de las secuencias obtenidas muestra un alto grado de conservación interespecífica en las secuencias codificadoras, rDNA 5S y rDNA 5.8S, y una gran variabilidad en los espaciadores. El método de identificación de especies desarrollado ha permitido además detectar la existencia de hibridación entre almeja fina, Ruditapes decussatus, y almeja japonesa, Ruditapes philippinarum. Nueve de los individuos identificados morfológicamente como Ruditapes decussatus presentaban secuencia rDNA 5ª e ITS específicas tanto de Ruditapes decussatus como de Ruditapes philippinarum. Posteriores experimentos FISH utilizando sondas rDNA 5S e ITS especie específicas sobre SC de estos individuos dieron lugar a patrones de señales de hibridación correspondientes con los detectados en Ruditapes decussatus y Ruditapes philippinarum y, por lo tanto, confirmaron su naturales híbrida. La presencia en los híbridos de secuencias mitocondriales de Ruditapes decussatus indica que aquéllos son resultado del cruzamiento entre almejas fina hembras y almeja japonesa machos. La existencia de hibridación entre una especie nativa y otra introducida debe ser tenida en cuenta en el diseño de la política marisquera en Galicia.