Procedimiento para la valoración secuencial por western-blot en una misma muestra de la proteína NCAM y de su cola de ácido polisiálico (PSA)

Resumo

La proteína NCAM presenta la peculiaridad de estar unida por covalencia a una cola de ácido polisiálico, cuya presencia y grado de elongación son vitales en su biología funcional. Los estudios sobre la expresión de esta proteína deben acompañarse, por tanto, del análisis de su grado de polisialilación. El procedimiento de invención consiste en la valoración inmunoquímica sobre una misma muestra biológica de la forma polisialilada de la proteína NCAM, PSA-NCAM, concatenando sendas etapas de western-blot (para la inmunodetección seriada por quimioluminiscencia de NCAM y PSA, o viceversa) separadas por una fase de borrado (stripping). El procedimiento se completa con una segunda fase de borrado y la realización del preceptivo control de carga proteica. Este método consigue el ahorro de muestra biológica y además preserva el mantenimiento de similares condiciones de ensayo durante el análisis de ambas moléculas.