Superenrollamiento del dna en procariontes y eucariontesestudio de su función y la del bloqueo de las horquillas de replicación en procesos de recombinación

Resumo

Existen diferencias significativas en la naturaleza y regulación del supernrollamiento procesos fundamentales como la reclinación y la transcripción, utilizando como modelo de procariontes células de Scherichia coli y como modelo de eucariontes células de Sacchromyces cervisiae. También hemos estudiado la función del bloqueo de las horquillas de replicación en procesos de recombinación en el DNA ribosómico (rDNA) de S.cerevisiae. De los resultados obtenidos podemos concluir que en E.coli el DNA está más negativamente superenrollado que en S.cerevisiae y una reducción del superenrollamiento negativo en células de E.coli afecta tanto a la viabilidad celular como al número de copias plasmídicas. A diferencia de lo que ocurre en el caso de plácidos parcialmente replicados en E.coli, los minicromosomas de S.cerevisiae son capaces de adquirir superenrollamiento positivo. Esto indica que en las horquillas detenidas en el complejo RFB/Fob1p de S.cerevisiae, el superenrollamiento positivo no es capaz de generar la formación de horquillas en retroceso. Además en los microsomas de S.cerevisiae parcialmente replicados no se forman nudos entre cromátidas hermanas detrás de las horquillas. Finalmente, la integración de DNA extracromosómico en el rDNA cromosómico de S.cerevisiae no obedece exclusivamente a un bloque de las horquillas ya que en ausencia de Fob1p ocurre tanto en la región 3' del fragmento que codifica para el 35S del rRNA cromosómico, debido al a colisión frontal de las maquinarias de replicación y transcripción, como en la región en la que habría una barrera en presencia de Fob1p.