Bioprospecting for Novel Thermozymes in Metagenomic Libraries from Hot Springs

Resumo

En la presente tesis doctoral se ha estudiado el metagenoma de dos fuentes termales localizadas en la ciudad de Ourense (Galicia, España): As Burgas y Muiño da Veiga. Los objetivos principales fueron la identificación y la caracterización bioquímica de enzimas termófilas y termotolerantes (termozimas) codificadas en dichos metagenomas y con posible utilidad biotecnológica, así como la secuenciación de uno de estos metagenomas para estudiar la composición de la comunidad microbiana y sus posibles interacciones metabólicas. Además, el estudio de la secuencia de ADN ha permitido realizar predicciones y búsquedas de nuevas termozimas, expandiendo el alcance de la técnica para la bioprospección de estos catalizadores con interés biotecnológico. Objetivos 1. Construir metagenotecas a partir del ADN ambiental extraído de muestras de dos aguas termales de la región de Ourense: As Burgas y Muiño da Veiga. 2. Realizar cribados funcionales con las metagenotecas para identificar actividades enzimáticas de interés usando sustratos específicos. 3. Secuenciar, clonar, expresar y purificar una enzima con actividad lipolítica para realizar predicciones a partir de su secuencia y para su caracterización bioquímica. 4. Secuenciar el metagenoma de la muestra de Muiño da Veiga para realizar un análisis bioinformático que permita describir la comunidad microbiana y sus interacciones metabólicas. 5. Analizar el metagenoma secuenciado para identificar termozimas que puedan ser clonadas y expresadas en el laboratorio. 6. Clonar, expresar y purificar una β-xilosidasa y una endoglucanasa predichas por el análisis de secuencia para realizar una caracterización bioquímica y confirmar su potencial biotecnológico.