Purificación y caracterización genética y molecular de lipasas de candida rugosa

Résumé

Las lipasas son una familia de enzimas que catalizan la hidrólisis de triglicéridos con diferentes tipos de especificidad (y capacidad para reacciones de síntesis), lo que les confiere, especialmente a las de origen microbiano, un potencial industrial en los sectores alimentarios y farmacéutico. Candida rugosa posee al menos 7 genes que codifican (con alguna excepción al código genético universal) otras tantas lipasas cuya purificación, caracterización y cristalización no ha sido posible en todas ellas. Precisamente, los costes de producción y la disponibilidad de formas puras ha limitado hasta ahora la extensión de los usos y la comprensión de las relaciones estructura-actividad. El presente trabajo que comprende la purificación y caracterización (bioquímica y cinética) de las lipasas de Candida rugosa presentes tanto en un extracto comercial como en un postincubado producido ad hoc, forma parte d eunproyecto más amplio que integra estos aspectos junto con los de producción a escala piloto y aplicación en reacciones de química fina. De este modo, se ha resuelto, partiendo de las fuentes indicadas y proponiendo diferentes alternativas operatorias, la purificación de las lipasas Lip1, Lip2 y Lip3 (esta última en forma de monómero y dímero) en cantidades suficientes como para permitir comparar de forma sistemática sus propiedades y, en el caso particular de Lip2, su cristalización. Así, a pesar de su similitud en cuanto a valores de peso molecular, punto isoeléctrico y grado de glicosilación, las enzimas mostraron diferencias en la especificidad de sustrato, especialmente significativas frente a la longitud de cadena de triglicéridos y en la estabilidad frente al efecto combinado del pH y la temperatura, siendo las más termoestables Lip2 y Lip3 dimérica. También el comportamiento cinético fue diferente. Mientras Lip3 dimérica mostró perfiles prácticamente michaelianos como consecuencias de la mayor